鸡毒/滑液型支原体抗体检测试剂盒
移液器
量筒
试管
96孔稀释板
双蒸水或去离子水
酶标仪
洗板机
二、样品和试剂稀释步骤A、血清：用样品稀释液作两次1：10（10μl血清 90μl样品稀释液）稀释，最终稀释100倍；如第二步稀释在血清板上进行，可适当增加，例如12μl血清 108μl样品稀释液
B、阳性血清：对照在离心管里加300μl样品稀释液，再加3μl阳性对照充分混匀；
C、阴性血清：对照在离心管里加300μl样品稀释液，再加3μl阴性对照充分混匀；
D、洗涤液：用20ml洗涤液加380ml蒸馏水或去离子水，混匀；
E、酶标记物：100μl酶标记物加10ml样品稀释液，混匀；
F、终止液：2.5ml终止液加10ml实验室级水混匀（注意：5倍终止液冷藏保存时可能会产生白色固体，这并不影响产品质量。可以在室温或37°C下溶解后使用）。
三、ELISA检测步骤A、事先画好表格并标记待检样品和阴、阳性对照的位置，取出一块酶标板，相应做好标记；
B、将稀释好的阳性对照加入A1、B1孔，100ul/孔；
C、将稀释好的阴性对照加入C1、D1孔，100ul/孔；
D、将稀释好的待检样品加入到相应孔内，100ul/孔；
E、室温孵育30分钟。
F、倒出孔中液体，每孔加入300μl稀释好的洗涤液，震荡，倒出洗液，在吸水纸上拍板，
确保无残留。重复以上步骤，总共洗板3-4遍。
G、每孔加入100μl稀释好的酶标记物。
H、室温孵育30分钟；
I、倒出孔中液体，同f洗涤。
J、每孔加入100μl底物。
K、室温孵育15分钟。
L、每孔加入100μl稀释好的终止液。
M、用酶标仪在405-410nm波长下读板。
四、结果实验的有效性
只有当阴性对照算术平均值小于0.200，阳性减去阴性所得的矫正值在0.250-1.200之间，阳性对照本身OD在0.35-1.20之间，测定结果才有效；如果三者中任何一个不在范围内，则测定结果无效，需重新检测。如果待检样品的SP值小于0.600，则视其抗体滴度为0，或者没有MG/MS抗体的反应。
结果的计算
a）阳性平均值（PCX）=（A1 B1）/2
b）阴性平均值（NCX）=（C1 D1）/2
c）S/P值：S/P=（样品OD值-NCX）/（PCX-NCX）
d）抗体滴度的换算关系：Log10滴度=（1.464×log10SP） 3.197
结果分析
SP临界值：辛百克斯每种ELISA检测试剂盒都有一个与阳性血清对照对应的SP临界值，用这个SP临界值可以很清楚地去区分阳性样品与阴性样品，MG/MSELISA检测试剂盒的SP临值如下：
好的实验结果必须遵守实验操作规则，使用好的安全实验技术；
所有试剂和样品都要视为生物安全材料处理；
试剂盒中的试剂如果已经过期，不要使用；
使用过的洗液，对照血清，检测板，检测样品和其它检测试剂必须用漂白剂或强氧化剂作无害化处理；
所有试剂不要被血清和细菌污染；
每块酶标板都有湿度显示，如果显示出粉红色，板则需清理（漂白剂清洗）或无害化处理；
谨防试剂溅入眼睛和皮肤，一旦溅入，立即用凉水冲洗干净；
不要用嘴对着吸管吸取试剂瓶内的试剂。
试剂盒内所有组份需在2-8°C保存；在开始实验前，所有的检测试剂必须回温至室温（21°C-24°C）！室温高可能导致OD值偏高室温低可能导致结果不成立。
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